1. PBS平衡
2. PBS稀釋DAPI stock液至300nM，滴加300μL這種稀釋液于細(xì)胞上。
3. 孵育5分鐘。
4. PBS中涮洗幾次，涳干過量緩沖液，抗淬滅劑封片。
FISH復(fù)染：
1. PBS中稀釋至30nM，吸300μL滴于樣品上，塑料玻片有助于平均分配染料。
2. 黑暗室溫孵育30分鐘。
3. 去掉蓋玻片，PBS和dH2O中小心盥洗。
4. 去掉過量液體，綿紙?jiān)跇悠愤吘壭⌒奈 ?/span>
5. 蓋上蓋玻片，蠟或指甲油封片?；虬垂?yīng)商的指導(dǎo)加抗淬滅劑。
熒光顯微鏡觀察。
Rhodamine 123 染色
中文名稱：羅丹明 123
目 的：測細(xì)胞內(nèi)線粒體的跨膜電位
EX/EM： 505/534
染液配制： 羅丹明123 粉劑用甲醇配制成1mg/ml的儲備液，100ul/支分裝，-20℃保存。染色時用Dulbecco’s PBS緩沖液將其稀釋為5ug/ml。
染色步驟：
培養(yǎng)細(xì)胞
Dulbecco’s PBS緩沖液漂洗2～3次(緩沖液預(yù)熱至室溫或37℃)
Rhodamine 123(5ug/ml) 37℃孵育1小時
Dulbecco’s PBS緩沖液漂洗2～3次
加0.5ml Dulbecco’s PBS，上機(jī)測量
Fluo-3-AM 染色 (測細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度)
染液配制：Fluo-3-AM 50ug溶于45ul DMSO(Fluo-3-AM濃度 1mM)，15ul/支分裝，-20℃保存。染色時用15～50mM HEPES緩沖液將其稀釋為1～20uM(如1.5ml 為10uM)。
染色步驟：
培養(yǎng)細(xì)胞
緩沖液漂洗2～3次
Fluo-3-AM (1～20uM) 37℃或室溫孵育0.5～1小時
緩沖液漂洗2～3次
加0.5ml 緩沖液，上機(jī)測量。
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