Amplite 熒光法黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒 紅色熒光

        Amplite 熒光法黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的谷氨酸檢測的試劑盒，XO（黃嘌呤氧化酶）是一種能催化次黃嘌呤到黃嘌呤或者更進一步催化黃嘌呤到尿酸的酶。在嘌呤的分解代謝扮演著重要角色。XO通常能在肝臟或者空腸檢測到。在重度肝損傷，XO釋放到血液中，因此血液中XO檢測試驗可以用來確定肝臟損傷的發(fā)生。黃嘌呤尿是一種少見遺傳病，缺少XO導致血中高濃度黃嘌呤引起腎衰竭等健康**。Amplite XO檢測試劑盒提供了一種快速超敏感的方法，來檢測XO的活性。本試劑盒可以用于96或384微孔板分析，并且無需任何分步驟，就可以輕易地實現(xiàn)自動化。在實驗分析種，XO氧化嘌呤堿基，次黃嘌呤、黃嘌呤轉變成尿酸或者超氧化物，后者又自發(fā)的降解為雙氧水。該試劑盒使用我們的Amplite Red底物使其成為雙記錄模式。紅色的熒光信號很容易的通過熒光酶標儀（540／590nm）檢測到或者被酶標儀（576nm）檢測。Amplite黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒在100 ul檢測體積中能檢測到0.15mU／ml的XO。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供*上等的Amplite 熒光法黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒。 

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樣品實驗方案

簡要概述

1.XO標準品或測試樣品（50μL）
2.添加XO工作溶液（50μL）
3.在室溫下孵育15-30分鐘
4.在Ex / Em = 540/590 nm處讀取熒光強度（截止570 nm）

溶液制備 

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。
1. Amplite 紅色儲備液（250X）：
將40μLDMSO（組分F）加入到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中。應立即使用原液。注意：在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰基乙醇存在下，Amplite Red底物不穩(wěn)定。反應中DTT或2-巰基乙醇的*終濃度應不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應應在pH = 7-8下進行。推薦使用所提供的測定緩沖液，pH = 7.4。

2. HRP庫存解決方案（500X）：
將100μL測定緩沖液（組分B）加入到辣根過氧化物酶（組分C）的小瓶中。

3.黃嘌呤氧化酶（XO）標準溶液（1 U / mL）
將200μL測定緩沖液（組分B）加入黃嘌呤氧化酶標準品（組分E）的小瓶中。

2.標準溶液

XO標準
將10μL1U/ mL XO標準溶液加入990μL測定緩沖液（組分B）中以制備10mU / mL XO標準溶液（XO7）。 進行1：3連續(xù)稀釋，得到剩余的連續(xù)稀釋的XO標準品（XO6-XO1）。

3.工作溶液

將20μLDelterite Red儲備溶液（250X），10μLHRP儲備溶液（500X）和50μL黃嘌呤（100X，組分D）加入5mL分析緩沖液（組分B）中，使總體積為 5.08mL黃嘌呤氧化酶（XO）工作溶液,避光。

樣品分析

表1.實心黑色96孔微孔板中XO標準品和測試樣品的布局

表2.每個孔的試劑組成

1.根據(jù)表1和表2中提供的布局，將XO標準品（XO），空白對照（BL）和測試樣品（TS）制備成固體黑色96孔微孔板。對于384孔板，使用25μL 每孔試劑代替50μL。

2.向XO標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50μLXO工作溶液，使總XO測定體積為100μL/孔。 對于384孔板，在每個孔中加入25μLXO工作溶液，總體積為50μL/孔。

3.在室溫下孵育反應15至30分鐘，避光。

4.用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570nm，發(fā)射= 590-600nm（*佳Ex / Em = 540 / 590nm），截止= 570nm監(jiān)測熒光強度。

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