用于定量測定血清/血漿樣品和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的人類載脂蛋白A1（apoA1）。請注意，洗滌，封閉和孵育緩沖液應(yīng)包含清潔劑。吐溫20，Triton X-100或NP40的使用濃度為0.05-0.5％。在封閉緩沖液和孵育緩沖液中，建議使用0.1％BSA，而不要使用牛血清，因為HDL 44也可以結(jié)合牛apoA1。

血清/血漿樣品：分析人血清/血漿樣品時，建議使用Apo ELISA緩沖液稀釋樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和檢測抗體。該緩沖液可防止可能由于人血漿和血清中常見的嗜異性抗體的干擾而引起的假陽性讀數(shù)。apoB分析所必需的樣品的Triton X處理不會干擾apoA1分析。建議將血清/血漿樣品稀釋150,000x至200,000x，請參見https://www.mabtech.com/knowledge-center/apodilution的稀釋指南。避免重復(fù)凍融循環(huán)，不要將樣品保存在-20°C下。儲存在-20°C的樣品會產(chǎn)生錯誤的高apoA1值。
注意：該試劑盒中未提供Apo ELISA緩沖液。

試劑：抗體是在含有疊氮化鈉（0.02％）的無菌過濾（0.2μm）PBS中提供的。鏈霉親和素-ALP用0.1M Tris緩沖液和0.002％Kathon CG提供。
標(biāo)準(zhǔn)范圍：0.6-40 ng / ml

樣品實驗方案

儲備溶液配制

通過將小瓶4內(nèi)試劑重新溶于含1％BSA的1 ml PBS中來制備apoA1標(biāo)準(zhǔn)品，不要攪拌，在室溫下放置15分鐘，然后渦旋振蕩3s。得到的儲備液為4μg/ ml，應(yīng)立即使用或以等分試樣的形式儲存在-20°C下，以備將來使用。我們建議等分試樣在初次使用后不要重新冷凍。為了進(jìn)行測試，請使用標(biāo)準(zhǔn)范圍作為指導(dǎo)來準(zhǔn)備原液的稀釋液。

操作步驟

1. 通過添加100μl/孔，用mAb HDL 110涂覆高蛋白結(jié)合ELISA板，將其在pH 7.4的PBS中稀釋至2μg/ ml。在4-8°C下孵育過夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗滌兩次。
3. 通過添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育緩沖液）的0.05％Tween 20來封閉板。在室溫下孵育1小時。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗滌五次。
5. 通過將小瓶4重新溶于含1％BSA的1 ml PBS中來制備apoA1標(biāo)準(zhǔn)品，不要攪拌，在室溫下放置15分鐘，然后渦旋振蕩3s。得到的儲備液為4μg/ ml，應(yīng)立即使用或以等分試樣的形式儲存在-20°C下，以備將來使用。我們建議等分試樣在初次使用后不要重新冷凍。為了進(jìn)行測試，請使用標(biāo)準(zhǔn)范圍作為指導(dǎo)來準(zhǔn)備原液的稀釋液。
6. 加入100μl/孔的樣品或在血清或血漿樣品的孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液，并在室溫下孵育1-2小時。血清/血漿樣品的稀釋建議可在以下網(wǎng)址找到：https：// www。mabtech.com/knowledge-center/apodilution。
7. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
8. 在孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中添加100μl/孔的0.5μg/ ml mAb HDL 44-生物素用于血清/血漿樣品。在室溫下孵育1小時。
9. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
10. 在孵育緩沖液中以100：1 /孔的比例稀釋1：1000的鏈霉親和素ALP。在室溫下孵育1小時。
11. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
12. 加入100μl/孔的適當(dāng)?shù)孜锶芤?，例如對硝基苯基磷酸酯（pNPP#11619）。
13.  在適當(dāng)時間的顯影后，在ELISA讀數(shù)器中測量光密度（對于pNPP為405 nm）。