Amplite?人載脂蛋白B（ApoB）試劑盒*針對ALP ELISA開發(fā)進(jìn)行了優(yōu)化*

用于定量測定血清/血漿樣品和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的猴載脂蛋白B（apoB）。請注意，洗滌，封閉和孵育緩沖液應(yīng)包含清潔劑。吐溫20，Triton X-100或NP40的使用濃度為0.05-0.5％。在封閉緩沖液和孵育緩沖液中，建議使用0.1％BSA。

血清/血漿樣品：為防止不同的LDL粒徑干擾，血清/血漿樣品應(yīng)使用Triton X-100處理。用1％Triton X將樣品稀釋2倍，然后渦旋5秒鐘。對于apoB標(biāo)準(zhǔn)品或細(xì)胞系產(chǎn)生的樣品，不需要Triton X處理。分析人血清/血漿樣品時，建議使用Apo ELISA緩沖液稀釋樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和檢測抗體。該緩沖液可防止可能由于人血漿和血清中常見的嗜異性抗體的干擾而引起的假陽性讀數(shù)。Apo ELISA緩沖液已使用來自正常健康人類獻(xiàn)血者的血清/血漿進(jìn)行了驗證。請注意，尚未評估來自患有各種**或其他狀況的人類受試者的樣品中的嗜異性抗體干擾。凍結(jié)和解凍血清/血漿會降低這些抗體對apoB的識別。建議將血清/血漿樣品稀釋5,000x至8,000x。
注意：該試劑盒中未提供Apo ELISA緩沖液。

樣品實驗方案 

操作步驟

1. 通過添加100μl/孔，用mAb LDL 20/17涂覆高蛋白結(jié)合ELISA板，將其在pH 7.4的PBS中稀釋至2μg/ ml。在4-8°C下孵育過夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗滌兩次。
3. 通過添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育緩沖液）的0.05％Tween 20來封閉板。在室溫下孵育1小時。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗滌五次。
5. apoB標(biāo)準(zhǔn)品是由50％甘油穩(wěn)定的純化LDL。濃度為125μg/ ml。對于測試，請使用標(biāo)準(zhǔn)范圍作為指導(dǎo)來準(zhǔn)備原液的稀釋液。
6. 加入100μl/孔的樣品或在血清或血漿樣品的孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液，并在室溫下孵育1-2小時。請注意上述血清/血漿樣品的特殊注意事項。 
7. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
8. 在孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中以100μl/孔的濃度添加1μg/ ml的mAb LDL 11-生物素用于血清/血漿樣品。在室溫下孵育1小時。
9. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
10. 在孵育緩沖液中以100：1 /孔的比例稀釋1：1000的鏈霉親和素ALP。在室溫下孵育1小時。
11. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
12. 加入100μl/孔的適當(dāng)?shù)孜锶芤?，例如對pNPP。
13. 在合適的顯影時間后，在ELISA酶標(biāo)儀中測量光密度（對于pNPP為405 nm）

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