Sanger法是DNA測序中早靠譜的方法之一，DNA由四種脫氧核苷酸三磷酸（dNTP）合成。將每個新核苷酸添加到后的dNTP的3'-OH基團中?？梢詫⒍撗跣剀杖姿幔╠dTTPs）添加到正在生長的DNA鏈中，但是當它出現(xiàn)時，鏈延長會停止，因為下一個要連接的核苷酸沒有3'-OH。待測序的DNA被制備成單鏈。該模板DNA帶有大量dATP，dGTP，dCTP和dTTP的混合物。加入四種雙脫氧核苷酸（ddATP，ddGTP，ddCTP和ddTTP）的混合物，每種混合物均以限量存在，并分別用發(fā)不同顏色的熒光的“標簽”標記。因為所有四個正常核苷酸都存在，所以鏈延伸正常進行，直到偶然地DNA聚合酶插入ddNTP（而不是正常dNTP）。如果正常核苷酸與雙脫氧形式的比率足夠高，則在插入ddNTP之前，某些DNA鏈將成功添加數(shù)百個核苷酸，從而終止該過程。在孵育期結束時，片段的長度從長到短分離，一個核苷酸之間的差異足以使該鏈與下一較短和下一較長鏈分開。當被激光束照射時，四個DDNTP中的每一個都會發(fā)出不同的熒光，可以通過自動掃描儀打印輸出序列。這些ddATP，ddGTP，ddCTP和ddTTP胺衍生物是開發(fā)Sanger測序試劑的重要組成部分。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的2-Aminoethoxypropargyl ddGTP。

參考文獻

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