標準操作規(guī)程（標記50μg蛋白質(zhì)）
將所有組分加熱并在打開前將樣品瓶短暫離心，并在開始結(jié)合前立即準備所需的溶液。 以下SOP是標記抗HDAC IgG抗體的實例。
1.準備蛋白質(zhì)溶液（溶液A）：
為了標記50g蛋白質(zhì)（假設目標蛋白質(zhì)濃度為1mg / mL），將5L（總反應體積的10％）的反應緩沖液（組分B）與50L目標蛋白質(zhì)溶液混合。
注1.如果您的蛋白質(zhì)濃度不同，請相應調(diào)整蛋白質(zhì)體積，使~50μg蛋白質(zhì)可用于標記反應。
注2：為了標記100g蛋白質(zhì)（假設目標蛋白質(zhì)濃度為1mg / mL），將10μL（總反應體積的10％）反應緩沖液（組分B）與100μL目標蛋白質(zhì)溶液混合。
注3：蛋白質(zhì)應溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中;如果蛋白質(zhì)溶解在甘氨酸緩沖液中，必須用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（來自Millipore的cat＃UFC501008）去除廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽（如硫酸銨和乙酸銨）。
注4：不純抗體、牛血清白蛋白（BSA）或明膠穩(wěn)定的抗體不會被很好標記。
注5：如果蛋白質(zhì)濃度小于1 mg / mL，則結(jié)合效率顯著降低。為獲得標記效率，建議終蛋白質(zhì)濃度范圍為1-2 mg / mL。
2.運行結(jié)合反應：
2.1將蛋白質(zhì)溶液（溶液A）加入一瓶標記染料（組分A）中，通過反復移液幾次將其混合均勻，或?qū)⑿∑繙u旋幾秒鐘。
注意：使用標記染料的兩個小瓶（組分A）通過將100μg蛋白質(zhì)分成2x50μg蛋白質(zhì)并使每個50μg蛋白質(zhì)與一小瓶標記染料反應來標記100μg蛋白質(zhì)。 將兩個小瓶合并用于下一步。
2.2將綴合反應混合物在室溫下保持30-60分鐘。
注意：如果需要，可以旋轉(zhuǎn)或搖動綴合反應混合物更長的時間。
3.停止共軛反應：
3.1添加5 L（對于50μg蛋白質(zhì)）或10L（對于100μg蛋白質(zhì)），其為TQ染色猝滅緩沖液（組分C）的總反應體積的10％到綴合反應混合物中（來自步驟2.2），將它們混合 好。
3.2在室溫下孵育10分鐘。
3.3標記的蛋白質(zhì)（抗體）現(xiàn)在可以使用了。