產(chǎn)品編號(hào)：17501（1mg）  

保持在-20°C并干燥

物理化學(xué)性質(zhì)：

分子量：1270.43

溶劑：水和DMSO

激發(fā)= 546nm

發(fā)射= 647nm

結(jié)構(gòu)式

生物應(yīng)用

7-氨基放線菌素D（7-AAD）是一種非滲透性染料，可用于鑒定非活細(xì)胞。 細(xì)胞用受損的質(zhì)膜或受損/無細(xì)胞代謝不能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞。 一旦在細(xì)胞內(nèi)，染料與細(xì)胞內(nèi)DNA結(jié)合，產(chǎn)生高度熒光的加合物，使細(xì)胞識(shí)別為無活力。它廣泛用于流式細(xì)胞儀。 7-AAD可以被488nm的氬激光激光線激發(fā)在650nm以上檢測(cè)到熒光。 雖然7-AAD的發(fā)射強(qiáng)度低于碘化丙啶（PI）的發(fā)射強(qiáng)度，較長(zhǎng)波長(zhǎng)的發(fā)射使其更適用于多重測(cè)定與其他488 nm激發(fā)的組合由于這些發(fā)射之間的光譜重疊極小，因此熒光染料如FITC和PE。

染色細(xì)胞的樣本方案

通常在所有其他染色后進(jìn)行7-AAD染色。 它只會(huì)污染死細(xì)胞。 以下程序適用于大多數(shù)細(xì)胞類型。 生長(zhǎng)培養(yǎng)基，細(xì)胞密度，其他細(xì)胞類型的存在和其他因素可能影響染色。 玻璃器皿上的殘留洗滌劑也可能影響許多生物的真實(shí)或明顯的染色明亮染色的材料出現(xiàn)在有或沒有細(xì)胞存在的溶液中。

1）。制備1-10mM DMSO儲(chǔ)備溶液。如果儲(chǔ)存在-20°C，DMSO儲(chǔ)備溶液可以使用6個(gè)月。

2）。使用適合您樣品的固定方案。

3）。通過離心沉淀細(xì)胞，并用染料將細(xì)胞重懸于緩沖鹽溶液或培養(yǎng)基中

在pH 7.4下染色。培養(yǎng)物中的貼壁細(xì)胞可以在蓋玻片上或細(xì)胞培養(yǎng)孔中原位染色。

4）。使用0.5至5μM的濃度添加7-AAD染色，并將其孵化15至60分鐘作為指導(dǎo)。

注意：在開始的實(shí)驗(yàn)中，在整個(gè)建議范圍內(nèi)嘗試幾種染料濃度

確定產(chǎn)生*佳染色的濃度。

5）。在Ex / Em = 545 / 650nm處測(cè)量熒光強(qiáng)度（使用FL3進(jìn)行流式細(xì)胞分析）

注意：7-AAD是一種潛在的致癌物質(zhì)。建議用戶戴上手套，防護(hù)服，和保護(hù)眼睛/面部，避免接觸皮膚和眼睛。

參考文獻(xiàn)

1. Kovalev AE, Iakovenko AA, Vekshin NL. (2004) [A study of interaction of 7-aminoactinomycin D with DNA by fluorescence correlation spectroscopy]. Biofizika, 49,1030.

2. Gaforio JJ, Serrano MJ, Algarra I, Ortega E, Alvarez de Cienfuegos G. (2002) Phagocytosis of apoptotic cells assessed by flow cytometry using 7-Aminoactinomycin D. Cytometry, 49, 8.