化學(xué)和物理特性
結(jié)構(gòu)式：
分子量：472.54
外觀：黃色粉末
溶劑：水或0.9% PBS
光譜特性：
激發(fā)=360nm，發(fā)射=625nm
生物應(yīng)用
Hydroxystilbamidine（也稱為Fluoro Gold）用于染色DNA和RNA。 它展出與RNA相比，當(dāng)與DNA結(jié)合時(shí)，熒光發(fā)射譜具有明顯不同。 這種陽(yáng)離子染料也經(jīng)常用作逆行神經(jīng)元示蹤劑。
染色樣品方案
Hydroxystilbamidine的使用與其他熒光示蹤劑基本相同。 主要區(qū)別在于Fluoro-Gold在注射后存活時(shí)間，濃度范圍，組織**和與其他組織化學(xué)技術(shù)的兼容性方面更靈活。 它比大多數(shù)其他熒光示蹤劑更耐褪色，更亮和更持久。
操作方法
1.染料濃度：使用1至10％羥基芪脒。 起初，建議濃度為4％。 如果在注射部位不希望發(fā)生壞死，或標(biāo)記太強(qiáng)，則將濃度降低至2％溶液。
2.染料注入：
2.1壓力注入 - 這可能是常用的應(yīng)用模式。 注射的體積范圍為0.05-1μl，通常為0.1-0.2μl。
2.2晶體 - 示蹤劑的晶體可以從微量移液管的**施用。
3.固定：盡管可以使用任何固定劑或不使用固定劑，但常使用含有4％甲醛的PBS。含有高濃度重金屬（如鋨，汞）的固定劑會(huì)熄滅熒光，而高濃度（超過(guò)1％）的戊二醛可能會(huì)增加背景熒光。
4.組織處理：含有羥基芪脒的組織可以根據(jù)常見(jiàn)的組織學(xué)技術(shù)進(jìn)行處理。常使用固定組織的冷凍切片。
5.聯(lián)用技術(shù)在此處理時(shí)，可以進(jìn)一步處理切片用于**標(biāo)記，例如放射自顯影，HRP組織化學(xué)，**細(xì)胞化學(xué)，**熒光示蹤劑，熒光復(fù)染劑等。
6.切片安裝及處理：切片通常安裝在涂有明膠的載玻片上，空氣干燥，浸入二甲苯中，并用非熒光DPX塑料封固劑蓋上蓋玻片。 切片可以用分級(jí)醇脫水，除非這與**示蹤劑不相容。 如果將羥基噻嗪與熒光**細(xì)胞化學(xué)組合，則將切片風(fēng)干并直接用DPX蓋上蓋玻片。
7.檢查和攝影：羥基芪脒可以使用寬帶紫外激發(fā)濾光片（激發(fā) - 323nm，發(fā)射 - 中性pH為620nm）用熒光顯微鏡觀察。當(dāng)用中性pH緩沖液處理組織時(shí)發(fā)出金色，而當(dāng)用酸性（例如PH3.3）pH緩沖液處理組織時(shí)發(fā)出藍(lán)色。它可以用數(shù)碼機(jī)或膠片機(jī)拍攝（使用Ektachrome 200-400 ASA膠片進(jìn)行彩色打印，使用可比較的速度膠片進(jìn)行黑白打?。４蠖鄶?shù)曝光時(shí)間范圍為10-60秒曝光，具體取決于物鏡放大倍數(shù)和標(biāo)簽強(qiáng)度。三十（30）秒的暴露是平均的。可以利用多次暴露來(lái)同時(shí)顯現(xiàn)羥基雌二醇和另一種示蹤劑。因此，UV將與明場(chǎng)照明組合以同時(shí)在放射自顯影中定位具有HRP或銀顆粒的Fluoro-Gold。類似地，藍(lán)光激發(fā)可以組合以也可視化FITC的綠色發(fā)**色，而綠色激發(fā)光可以用于同時(shí)觀察碘化丙啶或溴化乙錠（熒光復(fù)染劑）的紅色發(fā)**色。
參考文獻(xiàn)
1. Chaillou E, Tillet Y, Malbert CH. (2009) Organisation of the catecholaminergic system in the vagal motor nuclei of pigs: a retrograde fluorogold tract tracing study combined with immunohistochemistry of catecholaminergic synthesizing enzymes. J Chem Neuroanat, 38, 257.
2. He Z. (2009) Fluorogold induces persistent neurological deficits and circling behavior in mice overexpressing human mutant tau. Curr Neurovasc Res, 6, 54.
3. Mukerji S, Brown MC, Lee DJ. (2009) A morphologic study of Fluorogold labeled tensor tympani motoneurons in mice. Brain Res, 1278, 59.
4. Persson S, Havton LA. (2009) Retrogradely transported fluorogold accumulates in lysosomes of neurons and is detectable ultrastructurally using post-embedding immunogold methods. J Neurosci Methods, 184, 42.
5. Akhavan M, Hoang TX, Havton LA. (2006) Improved detection of fluorogold-labeled neurons in longterm studies. J Neurosci Methods, 152, 156.
6. McClellan AD, Zhang L, Palmer R. (2006) Fluorogold labeling of descending brain neurons in larval lamprey does not cause cell death. Neurosci Lett, 401, 119.
7. Abdel-Majid RM, Archibald ML, Tremblay F, Baldridge WH. (2005) Tracer coupling of neurons in the rat retina inner nuclear layer labeled by Fluorogold. Brain Res, 1063, 114.
8. Duva MA, Tomkins EM, Moranda LM, Kaplan R, Sukhaseum A, Stanley BG. (2005) Origins of lateral hypothalamic afferents associated with N-methyl-d-aspartic acid-elicited eating studied using reverse microdialysis of NMDA and Fluorogold. Neurosci Res, 52, 95.
9. Sanchez-Gonzalez MA, Warr WB, Lopez DE. (2003) Anatomy of olivocochlear neurons in the hamster studied with FluoroGold. Hear Res, 185, 65.
10. Yuan ZW, Lui VC, Tam PK. (2003) Deficient motor innervation of the sphincter mechanism in fetal rats with anorectal malformation: a quantitative study by fluorogold retrograde tracing. J Pediatr Surg, 38, 1383.
11. Haenggeli C, Kato AC. (2002) Rapid and reproducible methods using fluorogold for labelling a subpopulation of cervical motoneurons: application in the wobbler mouse. J Neurosci Methods, 116, 119.
12. Nogueira MI, de Rezende BD, do Vale LE, Bittencourt JC. (2000) Afferent connections of the caudal raphe pallidus nucleus in rats: a study using the fluorescent retrograde tracers fluorogold and true-blue. Ann Anat, 182, 35.