D蟲(chóng)熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下，D-熒光素鉀被氧化，產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm)，當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用報(bào)告基因。由于沒(méi)有背景干擾，因此可以很容易地檢測(cè)出低至0.02 pg 水平的熒光素酶。
培養(yǎng)基操作步驟：
1、 用分子生物學(xué)級(jí)水準(zhǔn)備一個(gè)30mg/L（200×）的儲(chǔ)存液。
a． 反復(fù)巔倒翻轉(zhuǎn)直到熒光素完全溶解。
b． 可以現(xiàn)配現(xiàn)用，或者分裝好保存于-20℃。
2、 加配好的熒光素儲(chǔ)存液到預(yù)溫的組織培養(yǎng)基中，使熒光素的終濃度為：150ug/ml。
3、 吸出培養(yǎng)細(xì)胞（沒(méi)有培養(yǎng)基殘留）。
4、 在成像前立即加入150ug/ml的熒光素溶液到細(xì)胞中。
a． 為了加強(qiáng)信號(hào)，在成像前可以把培養(yǎng)好的細(xì)胞在37℃中短暫的孵育。
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